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Etablierung einer Western Blot-Analyse zum Nachweis von Mycoplasma suis-Infektionen beim Schwein


Fischer, Petra. Etablierung einer Western Blot-Analyse zum Nachweis von Mycoplasma suis-Infektionen beim Schwein. 2003, University of Zurich, Vetsuisse Faculty.

Abstract

Ziel der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung einer Western?Blot-Analyse zum Nachweis von Antik?rpern gegen M.?suis. Mit diesem Nachweisverfahren wurden Serumproben eines unter definierten Versuchsbedingungen gehaltenen Tierkollektivs untersucht. Zu diesem Zweck wurde der Erreger aus ungerinnbar gemachtem Blut experimentell infizierter und splenektomierter Schweine aufgereinigt. Ein Kaninchen wurde mit dieser Antigenpr?paration immunisiert und ein anti-M.?suis- Kaninchen-Hyperimmunserum gewonnen. Die Charakterisierung dieses Hyperimmunserums ergab zwei M.?suis-spezifische Banden mit einem Molekulargewicht von 45?kDa und 77?kDa. Die Etablierung der Western?Blot-Analyse erfolgte durch Inkubation von M.?suis-Pr?parationen und Kontrollpr?parationen mit definiertem negativem und positivem Schweineserum. Auch hier waren die beiden immunreaktiven Proteine mit einem Molekulargewicht von 45?kDa und 77?kDa nachweisbar. Untersuchungen der Serumproben des Tierkollektivs erbrachten einen sicheren Nachweis bei allen infizierten und splenektomierten Tieren nach akuter Eperythrozoonose. Bei sechs von sieben latent infizierten Tr?gertieren ergab die Western Blot-Analyse ebenfalls ein positives Ergebnis. Alle Serumproben der Kontrollgruppe wurden negativ getestet. Die mittels Western?Blot durchgef?hrte Proteinanalyse von M.?suis und der erstmalige Nachweis von M.?suis-spezifischen Partialantigenen dient als Grundlage f?r weiterf?hrende immunologische Studien.

Aim of the present study was the development of a western blot analysis for the detection of antibodies against M.?suis. Serum samples from test animals kept under defined experimental conditions were investigated using this procedure. For this purpose, the infectious agent was isolated from the uncoagulable blood of experimentally infected and splenectomized pigs. A rabbit was immunized with antigen and anti-M.?suis-rabbit-hyperimmune serum isolated via affinity chromatography. The characterization of the anti-M.?suis-rabbit-hyperimmune serum revealed two M.?suis-specific bands of 45?kDa and 77?kDa, respectively. Western blot analysis was established for the detection of M.?suis-specific antibodies in pig sera by incubating M.?suis- and control samples with defined negative as well as defined positive pig serum. Here, too, both of the immunereactive proteins were detected, having molecular weights of 45?kDa and 77?kDa. In an assessment of serum samples from the test animals, conclusive detection was attained in all infected and splenectomized animals following acute eperythrozoonosis; in six out of seven latently infected carrier animals, the western blot analysis was also positive. All serum samples of the control group tested negative. The protein analysis of M.?suis using the western blot and the first-time detection of M.?suis-specific partial antigens may serve as a basis for future immunologic investigation to more accurately characterize the infective agent.

Abstract

Ziel der vorliegenden Arbeit war die Entwicklung einer Western?Blot-Analyse zum Nachweis von Antik?rpern gegen M.?suis. Mit diesem Nachweisverfahren wurden Serumproben eines unter definierten Versuchsbedingungen gehaltenen Tierkollektivs untersucht. Zu diesem Zweck wurde der Erreger aus ungerinnbar gemachtem Blut experimentell infizierter und splenektomierter Schweine aufgereinigt. Ein Kaninchen wurde mit dieser Antigenpr?paration immunisiert und ein anti-M.?suis- Kaninchen-Hyperimmunserum gewonnen. Die Charakterisierung dieses Hyperimmunserums ergab zwei M.?suis-spezifische Banden mit einem Molekulargewicht von 45?kDa und 77?kDa. Die Etablierung der Western?Blot-Analyse erfolgte durch Inkubation von M.?suis-Pr?parationen und Kontrollpr?parationen mit definiertem negativem und positivem Schweineserum. Auch hier waren die beiden immunreaktiven Proteine mit einem Molekulargewicht von 45?kDa und 77?kDa nachweisbar. Untersuchungen der Serumproben des Tierkollektivs erbrachten einen sicheren Nachweis bei allen infizierten und splenektomierten Tieren nach akuter Eperythrozoonose. Bei sechs von sieben latent infizierten Tr?gertieren ergab die Western Blot-Analyse ebenfalls ein positives Ergebnis. Alle Serumproben der Kontrollgruppe wurden negativ getestet. Die mittels Western?Blot durchgef?hrte Proteinanalyse von M.?suis und der erstmalige Nachweis von M.?suis-spezifischen Partialantigenen dient als Grundlage f?r weiterf?hrende immunologische Studien.

Aim of the present study was the development of a western blot analysis for the detection of antibodies against M.?suis. Serum samples from test animals kept under defined experimental conditions were investigated using this procedure. For this purpose, the infectious agent was isolated from the uncoagulable blood of experimentally infected and splenectomized pigs. A rabbit was immunized with antigen and anti-M.?suis-rabbit-hyperimmune serum isolated via affinity chromatography. The characterization of the anti-M.?suis-rabbit-hyperimmune serum revealed two M.?suis-specific bands of 45?kDa and 77?kDa, respectively. Western blot analysis was established for the detection of M.?suis-specific antibodies in pig sera by incubating M.?suis- and control samples with defined negative as well as defined positive pig serum. Here, too, both of the immunereactive proteins were detected, having molecular weights of 45?kDa and 77?kDa. In an assessment of serum samples from the test animals, conclusive detection was attained in all infected and splenectomized animals following acute eperythrozoonosis; in six out of seven latently infected carrier animals, the western blot analysis was also positive. All serum samples of the control group tested negative. The protein analysis of M.?suis using the western blot and the first-time detection of M.?suis-specific partial antigens may serve as a basis for future immunologic investigation to more accurately characterize the infective agent.

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Item Type:Dissertation (monographical)
Referees:Wittenbrink Max Michael, Heinritzi Karl
Communities & Collections:UZH Dissertations
Dewey Decimal Classification:Unspecified
Language:German
Place of Publication:Zürich
Date:2003
Deposited On:02 May 2019 13:45
Last Modified:15 Apr 2021 14:57
Number of Pages:46
OA Status:Green

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