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Immunohistochemical expression of Bax and Bak in canine non-neoplastic tissues


Croci, Martina. Immunohistochemical expression of Bax and Bak in canine non-neoplastic tissues. 2013, University of Zurich, Vetsuisse Faculty.

Abstract

Apoptose ist essentiell in der Embryonalentwicklung, bei der Aufrechterhaltung der Gewebshomöostase und zum Schutz vor maligner Transformation. Die Bcl-2 Proteinfamilie übt durch die Kontrolle der Integrität der äusseren Mitochondrienmembran eine Schlüsselrolle aus im intrinsischen Apoptoseweg. Die beiden pro-apoptotischen Bcl-2 Familienmitglieder Bax und Bak sind essentielle Komponenten davon. Diese Arbeit hat die Expression dieser Proteine in normalen, nicht neoplastischen kaninen Geweben untersucht. Zu diesem Zweck wurden zwei Antikörper gegen unterschiedliche Konformationen von Bax und ein Antikörper gegen Bak mittels Immunohistochemie (IHC) und Western Blot-Analyse von rekombinanten Proteinen und UV-behandelten Keratinozyten für kanine Gewebe validiert. Anschliessend wurde die Expression von Bax und Bak in einer breiten Palette von normalen kaninen Geweben mittels IHC von Gewebs-Microarrays und mittels Western Blots analysiert. Es zeigte sich, dass Bax und Bak in einer grossen Anzahl von normalen Geweben exprimiert sind. Das immunohistochemische Signal war am stärksten in Epithelzellen und v. a. im Zytoplasma lokalisiert. Lymphknoten zeigten ein diffuses Signal, für Bax stärker in der Mantelzone und für Bak stärker in den Germinalzentren. Der für die aktive Konformation von Bax spezifische Antikörper markierte Enterozyten, Leydigschen Zwischenzellen und vereinzelte Lymphozyten. Diese Studie liefert die Grundlage für Expressionsanalysen dieser Proteine in kaninen neoplastischen Geweben.

Apoptosis is critical for embryonic development, maintenance of tissue homeostasis and protection against malignant transformation. The Bcl-2 family of proteins plays a key role in intrinsic apoptosis by controlling the integrity of the outer mitochondrial membrane, and its pro-apoptotic members Bax and Bak are essential components of this pathway. The aim of this study was to provide data on the expression of these proteins in normal canine tissues. Two antibodies against Bax recognising different conformations of the protein and one antibody against Bak were validated by immunohistochemistry (IHC) and immunoblotting using canine recombinant proteins and keratinocytes treated with ultraviolet light. The antibodies were used immunohistochemically to label a wide panel of histologically normal tissues assembled on tissue microarrays. In addition, a subset of the tissues was evaluated by Western blot analysis. IHC and Western blot analyses revealed that Bax and Bak are widely expressed in non-neoplastic canine tissues. IHC showed almost exclusively cytoplasmic labelling and prominent labelling of epithelial cells. In lymph nodes, the labelling was diffuse for both proteins and showed enhanced intensities in the mantle zones for Bax and the germinal centres for Bak. Strong reactivity for the active conformation of Bax was detected only in enterocytes, Leydig cells and in scattered lymphocytes. Knowledge of the expression of Bax and Bak in normal tissues is a prerequisite in assessing the role of these proteins in canine neoplastic disease.

Abstract

Apoptose ist essentiell in der Embryonalentwicklung, bei der Aufrechterhaltung der Gewebshomöostase und zum Schutz vor maligner Transformation. Die Bcl-2 Proteinfamilie übt durch die Kontrolle der Integrität der äusseren Mitochondrienmembran eine Schlüsselrolle aus im intrinsischen Apoptoseweg. Die beiden pro-apoptotischen Bcl-2 Familienmitglieder Bax und Bak sind essentielle Komponenten davon. Diese Arbeit hat die Expression dieser Proteine in normalen, nicht neoplastischen kaninen Geweben untersucht. Zu diesem Zweck wurden zwei Antikörper gegen unterschiedliche Konformationen von Bax und ein Antikörper gegen Bak mittels Immunohistochemie (IHC) und Western Blot-Analyse von rekombinanten Proteinen und UV-behandelten Keratinozyten für kanine Gewebe validiert. Anschliessend wurde die Expression von Bax und Bak in einer breiten Palette von normalen kaninen Geweben mittels IHC von Gewebs-Microarrays und mittels Western Blots analysiert. Es zeigte sich, dass Bax und Bak in einer grossen Anzahl von normalen Geweben exprimiert sind. Das immunohistochemische Signal war am stärksten in Epithelzellen und v. a. im Zytoplasma lokalisiert. Lymphknoten zeigten ein diffuses Signal, für Bax stärker in der Mantelzone und für Bak stärker in den Germinalzentren. Der für die aktive Konformation von Bax spezifische Antikörper markierte Enterozyten, Leydigschen Zwischenzellen und vereinzelte Lymphozyten. Diese Studie liefert die Grundlage für Expressionsanalysen dieser Proteine in kaninen neoplastischen Geweben.

Apoptosis is critical for embryonic development, maintenance of tissue homeostasis and protection against malignant transformation. The Bcl-2 family of proteins plays a key role in intrinsic apoptosis by controlling the integrity of the outer mitochondrial membrane, and its pro-apoptotic members Bax and Bak are essential components of this pathway. The aim of this study was to provide data on the expression of these proteins in normal canine tissues. Two antibodies against Bax recognising different conformations of the protein and one antibody against Bak were validated by immunohistochemistry (IHC) and immunoblotting using canine recombinant proteins and keratinocytes treated with ultraviolet light. The antibodies were used immunohistochemically to label a wide panel of histologically normal tissues assembled on tissue microarrays. In addition, a subset of the tissues was evaluated by Western blot analysis. IHC and Western blot analyses revealed that Bax and Bak are widely expressed in non-neoplastic canine tissues. IHC showed almost exclusively cytoplasmic labelling and prominent labelling of epithelial cells. In lymph nodes, the labelling was diffuse for both proteins and showed enhanced intensities in the mantle zones for Bax and the germinal centres for Bak. Strong reactivity for the active conformation of Bax was detected only in enterocytes, Leydig cells and in scattered lymphocytes. Knowledge of the expression of Bax and Bak in normal tissues is a prerequisite in assessing the role of these proteins in canine neoplastic disease.

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Other titles:Immunohistochemische Expression von Bax und Bak in kaninen nicht-neoplastischen Geweben
Item Type:Dissertation (monographical)
Referees:Guscetti Franco
Communities & Collections:05 Vetsuisse Faculty > Institute of Veterinary Pathology
UZH Dissertations
Dewey Decimal Classification:570 Life sciences; biology
Uncontrolled Keywords:Apoptosis, Veterinary Medicine, Bak, Bax, Immunohistochemistry, Western blot
Language:English
Place of Publication:Zürich
Date:2013
Deposited On:03 May 2019 10:54
Last Modified:30 Oct 2019 06:35
Number of Pages:27
OA Status:Green
Related URLs:https://www.recherche-portal.ch/primo-explore/fulldisplay?docid=ebi01_prod010080025&context=L&vid=ZAD&search_scope=default_scope&tab=default_tab&lang=de_DE (Library Catalogue)

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