Abstract
Die Bcl-2 Familie spielt eine wichtige Rolle bei der Tumorentstehung, wobei die genauen Zusammenhänge bei der Entstehung von Lymphomen beim Hund derzeit noch nicht erforscht sind. Die Auswahl geeigneter Antikörper zum Nachweis verschiedener Bcl-2 Familienmitglieder mittels Immunhistochemie im Hundegewebe war ein Ziel dieser Arbeit. Ein weiteres Ziel war die Untersuchung der Expression von zwei anti-apoptotischen Familienmitgliedern, Mcl-1 und Bcl-x, im unveränderten Hundegewebe und Lymphomgewebe. Von insgesamt 21 Antikörpern zeigten zwölf eine spezifische Kreuzreaktion mit caninem rekombinanten, in Bakterien exprimierten Mcl-1, Bcl-x, Bcl-w, Bak und Bax. Diese Kreuzreaktion wurde mit der Anwendung einer immunhistochemischen Nachweismethode mit formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Bakterien nachgewiesen und durch Western Blotting bestätigt. Ferner wurden die immunhistochemische Protokolle anhand von speziellem Hundegewebe, in diesem Falle formalinfixierte und in Paraffin eingebettete, kultivierte Hundezellen sowie ausgewähltes unverändertes Normalgewebe, weiterentwickelt. Zum ersten Mal können in dieser Arbeit die immunhistochemischen Expressionsmuster der beiden Proteine in normalem Hundegewebe durch den Einsatz der Tissue Array Technik beschrieben werden. Sie stimmen weitgehend mit den Expressionsmustern in menschlichem Gewebe überein. Die Anwendung der gleichen Technik bei verschiedenen Subtypen von Hundelymphomen zeigte darüber hinaus, dass diese häufig Mcl-1 und in geringerem Ausmass Bcl-x exprimieren. Diese Forschungsergebnisse lassen eine Beteiligung der beiden anti-apoptotischen Bcl-2 Familienmitglieder in der Pathogenese von Hundelymphomen vermuten. Summary
The Bcl-2 family plays an important role in tumourigenesis but its role in the genesis of canine lymphoma is yet unexplored. The aims of the present study were to select antibodies for immunohistochemical detection of various Bcl-2 family members in canine tissues and to analyse the expression of two anti-apoptotic members, Mcl-1 and Bcl-x, in normal canine and lymphoma tissues. A total of twelve antibodies out of a panel of twenty-one were deemed to specifically cross-react with canine recombinant Mcl-1, Bcl-x, Bcl-w, Bak and Bax expressed in bacteria. This was determined using an immunohistochemical method in formalin-fixed, paraffin-embedded bacteria and confirmatory Western blotting. Immunohistochemical protocols for Mcl-1 and Bcl-x were further optimized for use in canine tissues using cultured canine cells and selected normal tissues fixed in formalin and embedded in paraffin. Immunohistochemical expression patterns of these two proteins in normal canine tissues, detected using tissue arrays, are described here for the first time. They roughly coincide with the expression patterns reported in human tissues. With the same techniques, canine lymphomas were shown to frequently express Mcl-1 and, to a lesser extent, Bcl-x, across a wide range of different subtypes. These findings suggest a role for these two anti-apoptotic Bcl-2 family members in the pathogenesis of canine lymphoma.
Zeller, Sarah