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Development of a real-time PCR assay for the detection of egg drop syndrome 1976 virus


Schybli, Martina Regina. Development of a real-time PCR assay for the detection of egg drop syndrome 1976 virus. 2010, University of Zurich, Vetsuisse Faculty.

Abstract

Vetsuisse-Fakultät Universität Zürich (2010)

Martina Regina Schybli

Institut für Veterinärbakteriologie, Abteilung Geflügelkrankheiten kathrin.ebnoether@vetbakt.uzh.ch

Development of a real-time PCR Assay for the Detection of Egg Drop Syndrome 1976 Virus

Das Egg drop Syndrom 1976 Virus (EDSV 1976), auch Duck Adenovirus 1 genannt (DAdV- 1), wird dem Genus Atadenovirus innerhalb der Familie Adenoviridae zugeordnet. Eine Infektion von Legehennen führt zu reduzierter Eiproduktion und zu Veränderungen der Eischalenqualität. Heutzutage wird die Diagnose mittels Virusisolation, konventioneller Polymerase Kettenreaktion (PCR) oder Serologie gestellt. Um einen sensitiveren und schnelleren Test zu entwickeln, wurde eine real-time quantitative Polymerase Kettenreaktion (qPCR) etabliert. Die Primer und Sonden wurden innerhalb des Open Reading Frame der Endoprotease (L3 23K) von EDSV 1976 konstruiert. Die Sensitivität wurde mithilfe von Verdünnungsreihen eines Plasmides bestimmt. 30 Plasmidkopien konnten in 100% der Ansätze nachgewiesen werden, während in 75% der Fälle sogar 3 Kopien amplifiziert werden konnten. Die Spezifität wurde mittels DNA von verschiedenen viralen und bakteriellen aviären Pathogenen bestimmt, wobei nur DNA von EDSV 1976 amplifiziert werden konnte. Ferner wurde die PCR angewendet, um Schweizer Legeherden mit reduzierter Eiproduktion zu testen. In keiner der untersuchten Herden konnte EDSV 1976 nachgewiesen werden. Zusammenfassend kann gesagt werden, dass die neu entwickelte real-time PCR sowohl sensitiv als auch spezifisch ist und eine verlässliche Methode zur Diagnose von Egg drop Syndrom 1976 darstellt.

Stichworte: Egg drop Syndrom 1976 Virus, real-time PCR, Schweizer Legehennen Vetsuisse-Fakultät Universität Zürich (2010)

Martina Regina Schybli

Institut für Veterinärbakteriologie, Abteilung Geflügelkrankheiten kathrin.ebnoether@vetbakt.uzh.ch

Development of a real-time PCR Assay for the Detection of Egg Drop Syndrome 1976 Virus

Summary

The Egg drop syndrome 1976 virus (EDSV 1976), also named Duck adenovirus 1 (DAdV-1), belongs to the genus Atadenovirus within the family Adenoviridae. Infection of laying flocks leads to a reduced egg production and changes in eggshell quality. Current diagnostic tests include virus isolation, conventional polymerase chain reaction (PCR) or serological methods. In order to establish a more sensitive and less time consuming assay, a real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was developed. Primers and probe within the open reading frame of EDSV 1976 endoprotease gene (L3 23K) were designed. The sensitivity was tested using 10-fold dilution series of a plasmid. The assay was able to detect 30 copies in 100% of the experiments and even 3 copies were amplified in 75%. Specificity was determined testing DNA of several viral and bacterial avian pathogens. All samples tested yielded a negative result with the exception of DNA from EDSV 1976. The assay was subsequently applied to screen Swiss laying flocks with a decreased egg production for the presence of EDSV 1976. EDSV 1976 could not be detected in any of the herds tested. In summary, the newly established real-time PCR is both sensitive and specific, and represents a reliable method for the diagnosis of Egg drop syndrome 1976.

Keywords: Egg drop syndrome 1976 virus, real-time PCR assay, Swiss layers

Abstract

Vetsuisse-Fakultät Universität Zürich (2010)

Martina Regina Schybli

Institut für Veterinärbakteriologie, Abteilung Geflügelkrankheiten kathrin.ebnoether@vetbakt.uzh.ch

Development of a real-time PCR Assay for the Detection of Egg Drop Syndrome 1976 Virus

Das Egg drop Syndrom 1976 Virus (EDSV 1976), auch Duck Adenovirus 1 genannt (DAdV- 1), wird dem Genus Atadenovirus innerhalb der Familie Adenoviridae zugeordnet. Eine Infektion von Legehennen führt zu reduzierter Eiproduktion und zu Veränderungen der Eischalenqualität. Heutzutage wird die Diagnose mittels Virusisolation, konventioneller Polymerase Kettenreaktion (PCR) oder Serologie gestellt. Um einen sensitiveren und schnelleren Test zu entwickeln, wurde eine real-time quantitative Polymerase Kettenreaktion (qPCR) etabliert. Die Primer und Sonden wurden innerhalb des Open Reading Frame der Endoprotease (L3 23K) von EDSV 1976 konstruiert. Die Sensitivität wurde mithilfe von Verdünnungsreihen eines Plasmides bestimmt. 30 Plasmidkopien konnten in 100% der Ansätze nachgewiesen werden, während in 75% der Fälle sogar 3 Kopien amplifiziert werden konnten. Die Spezifität wurde mittels DNA von verschiedenen viralen und bakteriellen aviären Pathogenen bestimmt, wobei nur DNA von EDSV 1976 amplifiziert werden konnte. Ferner wurde die PCR angewendet, um Schweizer Legeherden mit reduzierter Eiproduktion zu testen. In keiner der untersuchten Herden konnte EDSV 1976 nachgewiesen werden. Zusammenfassend kann gesagt werden, dass die neu entwickelte real-time PCR sowohl sensitiv als auch spezifisch ist und eine verlässliche Methode zur Diagnose von Egg drop Syndrom 1976 darstellt.

Stichworte: Egg drop Syndrom 1976 Virus, real-time PCR, Schweizer Legehennen Vetsuisse-Fakultät Universität Zürich (2010)

Martina Regina Schybli

Institut für Veterinärbakteriologie, Abteilung Geflügelkrankheiten kathrin.ebnoether@vetbakt.uzh.ch

Development of a real-time PCR Assay for the Detection of Egg Drop Syndrome 1976 Virus

Summary

The Egg drop syndrome 1976 virus (EDSV 1976), also named Duck adenovirus 1 (DAdV-1), belongs to the genus Atadenovirus within the family Adenoviridae. Infection of laying flocks leads to a reduced egg production and changes in eggshell quality. Current diagnostic tests include virus isolation, conventional polymerase chain reaction (PCR) or serological methods. In order to establish a more sensitive and less time consuming assay, a real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was developed. Primers and probe within the open reading frame of EDSV 1976 endoprotease gene (L3 23K) were designed. The sensitivity was tested using 10-fold dilution series of a plasmid. The assay was able to detect 30 copies in 100% of the experiments and even 3 copies were amplified in 75%. Specificity was determined testing DNA of several viral and bacterial avian pathogens. All samples tested yielded a negative result with the exception of DNA from EDSV 1976. The assay was subsequently applied to screen Swiss laying flocks with a decreased egg production for the presence of EDSV 1976. EDSV 1976 could not be detected in any of the herds tested. In summary, the newly established real-time PCR is both sensitive and specific, and represents a reliable method for the diagnosis of Egg drop syndrome 1976.

Keywords: Egg drop syndrome 1976 virus, real-time PCR assay, Swiss layers

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Item Type:Dissertation (monographical)
Referees:Hoop Richard Karl
Communities & Collections:05 Vetsuisse Faculty > Institute of Veterinary Bacteriology
UZH Dissertations
Dewey Decimal Classification:570 Life sciences; biology
Language:English
Place of Publication:Zürich
Date:2010
Deposited On:04 Feb 2011 16:38
Last Modified:24 Sep 2019 17:20
Number of Pages:32
Additional Information:Development of a real-time PCR assay for the detection of egg drop syndrome 1976 virus / vorgelegt von Martina Regina Schybli. - Zürich, 2010
OA Status:Green
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